Page 59 - Revista Argentina de Transfusión 3-2019

Revista Argentina
de Transfusión

E. Inmunohematología

E-1 (AAHITC19-17)
Diagnóstico prenatal del genotipo RhD: Experiencia luego de la implementación de una técni-
ca no invasiva.

(1)
SV Gallego (1)(2) , S Blanco (1)(2) , LH Carrizo , JA Dellacasa (3)
(1) Fundación Banco Central de Sangre, Córdoba, Argentina; Instituto de Virología “Dr. J.M. Vanella”, Facultad de
(2)
Ciencias Médicas, UNC, Córdoba, Argentina. Clínica Universitaria Reina Fabiola, Córdoba, Argentina.
(3)
INTRODUCCIÓN

Posterior al establecimiento de las bases moleculares del gen que codifica el antígeno D y al descubrimiento de la
existencia de DNA fetal libre circulante (cffDNA) en el plasma materno, se han desarrollado e implementado diver-
sas técnicas no invasivas para la genotipificación RhD fetal que permiten el manejo de mujeres embarazadas D
negativas previamente sensibilizadas o en riesgo de inmunización. La predicción exacta del estado fetal en rela-
ción al antígeno D permite administrar la profilaxis prenatal a mujeres D negativas con fetos RhD positivos y evita
la administración innecesaria en casos de fetos RhD negativos, optimizando los recursos disponibles. Es así que,
las pruebas no invasivas de genotipificación RhD fetal en plasma materno ya se ha incorporado a la práctica
clínica de muchos países, lo que ha producido un gran impacto en los protocolos de manejo de embarazadas D
negativas.
OBJETIVO

Presentamos aquí nuestra experiencia, hasta el momento, en el uso de un ensayo molecular para la
genotipificación RhD fetal en embarazadas D negativas, con el objetivo de demostrar la conveniencia del em-
pleo de un ensayo de diagnóstico prenatal no invasivo simple y rentable para la optimización de la profilaxis
anti-D en nuestra población.

MATERIALES Y MÉTODO

La genotipificación RHD fetal se realizó en muestras de plasma materno, a partir del cual se aisló cffDNA. Las
muestras fueron procesadas mediante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real para la
amplificación simultánea de secuencias de los exones 5 y 10 del gen RhD. Para confirmar la presencia de
cffDNA, se amplificó y detectó una secuencia del la región determinante del sexo Homo sapiens Y (SRY, número
de acceso de GenBank NC_000024.10, región 2787803 ... 2787865). Cada muestra se ensayó por duplicado en
una reacción uniplex para el exón 10 del gen RHD y por triplicado en una reacción múltiple para detección de
una secuencia del exón 5 del gen RHD y la secuencia SRY. La última secuencia se limitó a los fetos masculinos
como control para detectar cffDNA. Este abordaje se utiliza desde 2004 en el Laboratorio de Inmunohematología
del Banc de Sang i Teixits de Barcelona, España, para el genotipado prenatal de RhD en Cataluña y los resulta-
dos de la verificación de esta metodología implementada en nuestro laboratorio fueron recientemente publica-
dos.
Los resultados obtenidos en el plasma materno se corroboraron con el fenotipo del recién nacido, el cuál fue
determinado a partir de una muestra de sangre del talón obtenida en las 72 hs posteriores al nacimiento.

E. Inmunohematología Vol. XLV / N° 3 / 2019 Asociación Argentina Pág. 251
Págs. 251 / 270 de Hemoterapia,
Inmunohematología
y Terapia Celular